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階段一
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按照標(biāo)準(zhǔn)免疫程序免疫5只Balb/c小鼠。采用ELISA法測(cè)定血清滴度。
大約需要3-4mg蛋白免疫原或2mg多肽-KLH交聯(lián)物作為免疫原。 2mg多肽-BSA交聯(lián)物作為篩選用抗體。
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階段二
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當(dāng)血清中抗體滴度達(dá)到融合要求后，進(jìn)行細(xì)胞融合。
ELISA方法檢測(cè)雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清，篩選出抗體陽(yáng)性的雜交瘤細(xì)胞克隆，進(jìn)行克隆化，篩選出穩(wěn)定分泌抗體的克隆，擴(kuò)大培養(yǎng)。
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階段三
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測(cè)定抗體Ig的亞型。
將雜交瘤培養(yǎng)上清送客戶評(píng)價(jià)。
提供客戶選擇的3-5個(gè)克隆生產(chǎn)腹水（每只小鼠可獲得1-4ml腹水）。
提供3-5株雜交瘤細(xì)胞株。
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操作
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天數(shù)
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備注
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免疫
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0
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首次免疫 150-500ug/只，與弗氏完全佐劑混合，皮下多點(diǎn)注射 |
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21
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再次免疫 相同劑量與弗氏不完全佐劑混合，皮下多點(diǎn)注射 | |
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42
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加強(qiáng)免疫 相同劑量與弗氏不完全佐劑混合，皮下多點(diǎn)注射 | |
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70
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加強(qiáng)免疫 相同劑量與生理鹽水混合，耳靜脈注射 | |
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采血
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0
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采集對(duì)照血清，2ml |
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77
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采集血清2ml，測(cè)效價(jià) | |
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78
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放血，約30-50ml血清/兔 |
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